血小板特异性抗体的检测
作者:kunkun 日期:2010年11月09日 来源:本站原创 浏览:


血小板特异性抗体的检测
血小板表面含有不同结构和功能的糖蛋白受体,都有相应的配体,在血小板不同的活化状态,这些受体的表达是不一样的,一旦血小板被活化和释放,血小板表面就会出现新的标志物。利用上述特点,制成针对不同标志物的抗体,可对血小板的功能状态进行检测(表1、2)[9,10]。
流式细胞仪被用于观察血小板的功能或活化状态。例如可应用荧光素偶合的Echiststin,标记血小板膜糖蛋白受体抗体,观察糖蛋白受体占领的情况。
表1 血小板膜糖蛋白受体及其配体

表2 免疫检测用血小板特异的抗体

 1.血小板膜GP IIb/IIIa:已开发出不同的单克隆抗体,使我们能够区分开血小板GP IIb/IIIa受体静息、活化和配体占领后的不同状态。
  PAC-1,针对活化的血小板GP IIb/IIIa受体的抗体,能识别GP IIb/IIIa受体的纤维蛋白原结合部位。
  LIBS抗体,针对活化、而且被配体结合后的血小板GP IIb/IIIa受体的抗体。
  抗RIBS,配体诱发的结合部位抗体,针对与血小板GP IIb/IIIa受体结合,形态发生改变了的纤维蛋白原的抗体。
  2.血小板膜GPIb/IX/V:凝血酶激活的血小板表面GPIb受体复合物内化,抗体结合减少,因此,体内凝血酶活性增强可以用GPIb受体表达下降来监测。
  3.颗粒标志物:使用抗thrombospondin和抗P-选择素抗体,来监测释放出来的a颗粒;抗GP53结合主要反映血小板溶酶体的分泌情况。
  4.血小板-白细胞聚集:使用共聚焦显微镜检测循环血小板-白细胞聚集物,反映粘附到白细胞的活化血小板。使用流式细胞仪,在CD14阳性的白细胞上面结合的血小板特异的CD42免疫荧光,作为血小板-白细胞聚集物的标志。此结合激活白细胞,细胞表面粘附受体(如MAC-1)或L-选择素表达增强。
  5.血小板膜受体的遗传学分析:限制性片断长度分析允许对血小板糖蛋白受体进行多态性分析,另外也可利用等位基因特异的抗体,用流式细胞仪分析GPIIb/IIIa的多态性。据研究认为,GPIIIa的PIA多态性与血栓和心脏事件有关。
平均血小板体积也是预测心肌梗死后反复缺血事件的独立危险因子。
  血小板活化状态被用来对急性冠脉综合征、介入治疗后和心肌梗死存活者等的危险分层。