抗凝剂引起血小板假性减少原因分析及处理原则

　　1 材料与方法

　　1.1 仪器XE-2100血细胞分析仪(希森美康) 及配套试剂;KX-21血细胞分析仪及配套试剂。两仪器均经校正。

　　1.2 血小板稀释液(许汝和氏法)用于显微镜计数(手工法) ,按《全国临床检验操作规程(第二版) 》

　　1.3 EDTA-K2真空抗凝管,枸橼酸钠真空抗凝管。

　　1.4 实验方法。仪器分析:Sysmex - 2100血液分析仪用e-check质控品( level1, 2, 3)监控稳定性,按操作规程操作。首先用常规方法检测EDTAk2 抗凝静脉血,然后以同样方式检测枸橼酸钠抗凝静脉血。两者为液体抗凝剂,其抗凝剂与血液之比为1∶9,故细胞计数结果应再乘1.1方为准确的结果,本文中所有抗凝管结果均为校正后的数值。KX-21血细胞分析仪使用稀释模式。标本来自29例用XE-2100 血细胞分析仪(WBC+DIFF模式)进行血细胞分析时遇到PLT偏低的患者,散点图上没有任何提示信息,偶尔出现“PLT CLUMPS”提示。每例病人均采指血手工计数血小板-按文献[1]方法操作。每例病人的EDTA抗凝血与枸橼酸钠抗凝血均涂片经瑞氏染色后显微镜镜检。

　　2 结果

　　其中26例EDTA抗凝血血小板数值明显低于枸橼酸钠抗凝血,枸橼酸钠抗凝血血小板数值与手工计数法结果相接近。其他3例中EDTA抗凝血血小板数值与枸橼酸钠抗凝血结果相近,均明显低于血小板手工法计数结果。2.2两种抗凝血涂片瑞氏染色后镜检,第一组26例EDTA抗凝血涂片均可见聚集成堆的血小板,而枸橼酸钠抗凝血涂片则未见聚集的血小板,第二组3例EDTA抗凝血涂片及枸橼酸钠抗凝血涂片均可看到聚集成堆的血小板。

　　3 讨论

　　EDTA k2因其对血细胞形态影响很小,特别适用于全血细胞分析,已被ICSH认定并在临床广泛使用。但它偶尔可导致血小板聚集,发生血小板假性减少,健康人及患者均可出现[2]，至今未发现该现象的发生有何病理、生理意义,也与特殊药物的使用无关[3]。EDTA可导致血小板活化,血小板形态由正常的圆盘形改为圆球形,改变了血小板膜表面某种隐匿性抗原表位构象,与存在血浆中的自身抗体相结合[4],激活细胞膜中的磷脂酶A2和磷脂酶C,水解血小板膜磷脂并释放花生四烯酸、5-TH、胶原、凝血酶原等活性物质。这些活性物质能活化血小板纤维蛋白原受体,促使血小板与纤维蛋白原聚集成团。有报道认为枸橼酸钠代替EDTA来避免血小板聚集[5]，经实验发现极个别情况下, 血小板也对枸橼酸钠发生聚集反应引起血小板假性减低。

　　4 处理原则

　　对于首次检测血小板数值减低的标本均应手工计数血小板或涂片镜检,以确认是否存在抗凝剂所致血小板聚集现象。血小板对枸橼酸钠产生聚集的现象非常容易被忽略而导致假性血小板减少,因此对此类标本应引起足够的重视。如发现有聚集,血小板计数可改用稀释模式，将获得比较准确的结果。